Prosedur Langkah-demi-Langkah
PERINGATAN KESELAMATAN
Lakukan semua langkah di dalam lemari asam kimia. Serbuk PFA sangat berbahaya jika terhirup; gunakan kehati-hatian ekstrem saat menimbang dan memindahkannya.
1. Persiapan & Pemanasan Awal
- Tuangkan: ~800 mL 1X PBS ke dalam gelas kimia 2 L.
- Tempatkan: Gelas kimia di atas hot plate/stirrer.
- Masukkan: Batang pengaduk dan termometer.
- Panaskan: Nyalakan pengaduk dan pemanas. Panaskan larutan PBS sambil diaduk hingga suhu mencapai 60°C.
2. Penambahan Paraformaldehida (PFA)
PENTING:
Jangan biarkan larutan mendidih atau melebihi 65°C. Pemanasan berlebih dapat menguraikan formaldehida. Setelah 60°C tercapai, matikan pemanas.
- Timbang: Dengan hati-hati, timbang 40 g serbuk Paraformaldehida.
- Tambahkan: Perlahan ke dalam PBS 60°C yang sedang diaduk.
- Hasil: Larutan akan segera menjadi sangat keruh dan terlihat seperti susu.
3. Langkah Depolimerisasi (NaOH)
- Gunakan: Pipet bersih, tambahkan larutan 1 N NaOH setetes demi setetes ke dalam larutan keruh.
- Tunggu: Beberapa detik di antara setiap tetes.
- Lanjutkan: Menambahkan NaOH (biasanya 10-20 tetes) sampai larutan tiba-tiba berubah dari keruh menjadi jernih sempurna.
- HENTIKAN: Penambahan NaOH segera setelah larutan jernih (pH ~8.0-9.0).
4. Pendinginan & Penyesuaian pH
- Dinginkan: Angkat gelas kimia dari hot plate dan biarkan dingin sepenuhnya hingga suhu kamar.
PERINGATAN BCME
Lakukan langkah ini dengan sangat hati-hati, jauh di dalam lemari asam.
- Periksa pH: Setelah dingin, periksa pH larutan (akan bersifat basa).
- Sesuaikan: Kembalikan pH ke rentang fisiologis (pH 6.9 - 7.4) dengan menambahkan HCl 1 N encer setetes demi setetes sambil memantau pH.
5. Volume Akhir & Finalisasi
- Pindahkan: Larutan ke gelas ukur 1 L.
- Tambahkan: 1X PBS hingga volume total tepat 1 L (q.s. to 1 L).
- Saring: Larutan menggunakan unit filter 0.22 µm untuk menghilangkan partikulat.
- SELESAI: Larutan 4% PFA sekarang siap digunakan. Segera alikuot (bagi) ke dalam tabung-tabung steril dan simpan.
