Rangkaian Prosedur Pengelolaan Sediaan Histologi

Jadwal Pemrosesan Jaringan Otomatis

Protokol Semalam Spesimen Kulit (Total ~16 Jam)

Spesimen: Kulit Total Durasi: 15.5 Jam

Fase 1: Dehidrasi

Menghilangkan air dari jaringan (Total 7 Stasiun / 11 Jam)

Stasiun 1

Kimia: Etanol 70%

Suhu: Suhu Ruang

Durasi: 1 Jam

Stasiun 2

Kimia: Etanol 80%

Suhu: Suhu Ruang

Durasi: 1.5 Jam

Stasiun 3

Kimia: Etanol 95%

Suhu: Suhu Ruang

Durasi: 1.5 Jam

Stasiun 4

Kimia: Etanol 95%

Suhu: Suhu Ruang

Durasi: 1.5 Jam

Stasiun 5

Kimia: Etanol Absolut

Suhu: Suhu Ruang

Durasi: 1.5 Jam

Stasiun 6

Kimia: Etanol Absolut

Suhu: Suhu Ruang

Durasi: 2 Jam

Stasiun 7

Kimia: Etanol Absolut

Suhu: Suhu Ruang

Durasi: 2 Jam

Fase 2: Penjernihan (Clearing)

Menghilangkan alkohol (Total 2 Stasiun / 3 Jam)

Stasiun 8

Kimia: Xylene

Suhu: Suhu Ruang

Durasi: 1.5 Jam

Stasiun 9

Kimia: Xylene

Suhu: Suhu Ruang

Durasi: 1.5 Jam

Fase 3: Infiltrasi

Mengisi jaringan dengan parafin (Total 3 Stasiun / 3 Jam)

Stasiun 10

Kimia: Parafin Cair

Suhu: 60°C

Durasi: 1 Jam

Stasiun 11

Kimia: Parafin Cair

Suhu: 60°C

Durasi: 1 Jam

Stasiun 12

Kimia: Parafin Cair

Suhu: 60°C

Durasi: 1 Jam

Protokol Pewarnaan H&E Regresif

Tahap 1: Deparafinisasi

1

Xylene I (5 Menit)

Melarutkan parafin dari sediaan.

2

Xylene II (5 Menit)

Melarutkan sisa parafin untuk memastikan pembersihan total.

Tahap 2: Rehidrasi

3

Etanol Absolut I (2 Menit)

Menghilangkan xylene.

4

Etanol Absolut II (2 Menit)

Menghilangkan sisa xylene.

5

Etanol 95% (2 Menit)

Rehidrasi bertahap.

6

Etanol 70% (2 Menit)

Rehidrasi bertahap lanjutan.

7

Air Mengalir (2 Menit)

Menghilangkan alkohol, persiapan pewarna berbasis air.

Tahap 3: Pewarnaan Inti (Hematoxylin)

8

Hematoxylin Harris (3-5 Menit)

Mewarnai inti sel secara berlebih (overstain).

9

Pencucian (1 Menit)

Air mengalir menghilangkan kelebihan hematoxylin.

10

Diferensiasi (2-10 Detik) KRITIS

Asam Alkohol 1% menghilangkan pewarna dari sitoplasma, mempertajam inti.

11

Pencucian (1 Menit)

Air mengalir menghentikan proses diferensiasi.

12

Bluing (30-60 Detik)

Scott’s Tap Water mengubah inti dari ungu-merah menjadi biru tajam.

13

Pencucian (2-5 Menit)

Air mengalir membersihkan larutan bluing.

Tahap 4: Pewarnaan Sitoplasma (Eosin)

14

Etanol 95% (30 Detik)

Persiapan untuk pewarna berbasis alkohol.

15

Eosin Y (45 Detik - 2 Menit)

Mewarnai sitoplasma dan matriks ekstraseluler.

Tahap 5: Dehidrasi (Final)

16

Etanol 95% I (1 Menit)

Dehidrasi awal dan menghilangkan kelebihan eosin.

17

Etanol 95% II (1 Menit)

Dehidrasi lanjutan.

18

Etanol Absolut I (1 Menit)

Dehidrasi final.

19

Etanol Absolut II (1 Menit)

Dehidrasi final tuntas.

Tahap 6: Penjernihan (Clearing)

20

Xylene I (2 Menit)

Menghilangkan alkohol, membuat sediaan transparan.

21

Xylene II (2 Menit)

Penjernihan final.

Tahap 7: Mounting

22

Mounting (Secukupnya)

Aplikasi mounting medium dan gelas penutup untuk pengawetan permanen.